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其實ECL超敏發光液操作起來沒那么難!
發布時間:2022-03-14   點擊次數:189次
   ECL超敏發光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體及其關聯的抗原。其原理是,蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上,以一抗及HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白,或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸。洗膜后用本產品配制的ECL工作液,室溫孵育膜數分鐘,將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時,顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。
  ECL超敏發光液的操作方法
  1.按每平方厘米膜面積用配置發光液:根據發光液的需要量,取等體積A液和B液,混勻后避光保存備用;該發光液必須現配現用。
  2.取出膜,平放在干凈的保鮮膜上,膜的正面(蛋白質面)朝上,在膜的中央加適量的配置好的發光液,溶液向四周迅速擴散,覆蓋所有膜面。室溫保溫5分鐘左右,在此過程中請仔細觀察信號的出現。注意:如果信號強,在暗室中能很快看到陽性信號出現。
  3.待信號出現且穩定后,用鑷子夾起膜,除去多余的發光液,平放在干凈的保鮮膜上,膜的正面(蛋白質面)朝上,在轉移膜的上面再覆蓋一層保鮮膜,除去保鮮膜與轉移膜之間的空氣泡,請務必保證保鮮膜是干凈的,不被其他雜物或液體污染。
  4.在暗室中,將膜的正面對著X-光片,放入暗盒。第一次曝光時間在1分鐘左右(有經驗的操作者可以根據信號的強弱自行決定),立即按要求對X-光片進行顯影和定影,確定最佳曝光時間。曝光時間從數秒到數小時不等;特別弱的過夜曝光也可。
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